ACE 031 Peptid

I fast-fasesyntese er urenheder såsom manglende peptider og indsatte peptider tilbøjelige til at forekomme. For eksempel, når man syntetiserer Gln-Asn-bindingen, skal reaktionens pH (7,5-8,0) kontrolleres for at undgå asparagintranslokation. Ved at optimere koblingsmidlet (såsom brug af COMU i stedet for HBTU) kan andelen af ​​biprodukter reduceres markant.

ACE-031 er et 24-peptid, og risikoen for{10}}biproduktakkumulering under synteseprocessen er relativt høj. "Fragmentkondensationsmetoden" (dvs. at syntetisere 5-10 peptidfragmenter først og derefter forbinde dem ved hjælp af flydende-fasemetoden) kan øge det samlede udbytte. For eksempel er ACE-031 opdelt i Ala-Trp-Arg (fragment 1), Gln-Asn-Thr-Arg (fragment 2) osv., og hvert fragment syntetiseres separat før splejsning.

Kvalitetskontrolstandarder: Det færdige produkt skal opfylde følgende indikatorer:

 Renhed: Den primære toparealprocent påvist ved HPLC er større end eller lig med 98%, og den enkelte urenhed er mindre end eller lig med 0,5%;

 Indhold: Fejlen i aminosyresammensætningsanalysen er mindre end eller lig med ± 15 %;

 Opløselighed: Det er letopløseligt i vand eller DMSO, med en koncentration på større end eller lig med 10 mg/ml uden udfældning;

 Stabilitet: Renheden af ​​ACE-031 falder ikke med mere end 2% ved opbevaring ved -20 grader i 3 år.

Prøv først at bruge sterilt vand eller PBS (pH 7,4). Hvis opløseligheden er utilstrækkelig, justeres i henhold til polypeptidets egenskaber. For ACE-031, hvis det indeholder basiske aminosyrer (såsom Arg, Lys), prøv 10%-30% eddikesyre; hvis det indeholder sure aminosyrer (såsom Asp, Glu), skal du bruge 13 % ammoniakvand. For eksempel blev ACE-031 i en bestemt undersøgelse opløst i DMSO og derefter fortyndet med PBS til målkoncentrationen for at sikre, at den endelige DMSO-koncentration var under 1 % for at undgå cytotoksicitet.

Før opløsning genoprettes polypeptidet til stuetemperatur for at undgå fugtabsorption; vej hurtigt efter åbning af flaskehætten for at reducere eksponeringstiden; brug ultralyd eller opvarmning (mindre end eller lig med 50 grader) for at hjælpe med opløsning, men undgå høje temperaturer, der forårsager denaturering; efter opløsning, alikvoteres og opbevares for at undgå gentagen frysning og optøning.

Ved at tage den intramuskulære injektion af posterior kraniale fossa-muskler i rotter som eksempel, blev ACE-031 fremstillet i en koncentration på 5 mg/kg legemsvægt. Hvis gennemsnitsvægten af ​​rotterne var 20 g, og doseringsvolumenet var 100 μL, så er doseringen for en enkelt rotte=5 mg/kg × 0,02 kg=0.1 mg, og arbejdsopløsningskoncentrationen=0.1 mg/0,1 ml=1 mg/mL. I forsøget er det normalt nødvendigt at forberede yderligere 1-2 gange mængden af ​​dyr for at kompensere for tab.

I C2C12 myotubedifferentieringsmodellen er koncentrationsområdet for ACE-031 10-100 nM. For eksempel forberedelse af en 10 nM arbejdsopløsning: Tag 1 mg ACE-031 (molekylvægt 2956,49), opløs den i 1 mL DMSO for at opnå en 1 mM stamopløsning, og fortynd den derefter 100.000 gange med dyrkningsmediet til 10 nM.