Proteinase K-pulver CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. er en af ​​de mest erfarne producenter og leverandører af proteinase k-pulver cas 39450-01-6 i Kina. Velkommen til engros bulk højkvalitets proteinase k pulver cas 39450-01-6 til salg her fra vores fabrik. God service og rimelige priser er tilgængelige.

Proteinase K-pulverer en yderst effektiv, ikke-specifik serinprotease, der er meget udbredt i molekylærbiologi og biokemi, hovedsageligt til nedbrydning af proteiner og fjernelse af kontaminerende proteiner fra nukleinsyrepræparater. Det er afledt af svampen Engyodontium album (tidligere Tritirachium album) og bevarer sin aktivitet over et bredt område af temperaturer (20-60 grader) og pH (4-12), selv når det inkuberes i en opløsning indeholdende SDS (0,5-1%) eller urinstof (4M) under denaturerende forhold.

Enzymet nedbryder effektivt en lang række proteiner, herunder RNase og DNase, ved at spalte peptidbindinger (fortrinsvis hydrolysere carboxylterminalen af ​​alifatiske/aromatiske aminosyrer), og bruges derfor til fjernelse af nuklease i DNA/RNA-ekstraktion for at sikre nukleinsyreintegritet. Derudover er det almindeligt anvendt i vævsfordøjelse (f.eks. paraffin-indlejrede prøver), cellelyse og proteomiske undersøgelser.

Proteinase K-pulver leveres normalt i frysetørret form, som er meget stabil (-20 grader til langtidsopbevaring) og skal opløses i en buffer (f.eks. Tris-HCl, EDTA) før brug. Dets aktivitet er afhængig af Ca²+, men chelateringsmidler såsom EDTA hæmmer kun delvist enzymaktivitet. Selvnedbrydning skal undgås under håndtering, og varmeinaktivering ved 65 grader anbefales. På grund af dets kraftige proteinhydrolyserende evne kræves omhyggelig beskyttelse for at undgå hud- eller slimhindekontakt.

Proteinase k pulver, også kendt som Proteinase K eller EC 3.4.21.14, er en serinprotease isoleret og oprenset fra Tritirachium album Limber. Siden dens første isolation af Wolfgang Ebeling et al. i 1974 er proteinase K blevet meget brugt i biokemi, molekylærbiologi, medicin og industri på grund af dets høje aktivitet og brede substratspecificitet.

I processen med DNA- og RNA-ekstraktion er proteinase K's hovedfunktion at nedbryde proteiner bundet til nukleinsyrer, hvilket tillader DNA eller RNA at være fri i opløsning til efterfølgende ekstraktion og oprensning. På grund af dets stabilitet og høje aktivitet i denaturerende midler, såsom urinstof og SDS, anvendes proteinase K almindeligvis til isolering af plasmider eller genomisk DNA og RNA.

proteinase K kan hæmme aktiviteten af ​​RNAse og beskytte RNA mod nedbrydning.

1. DNA- og RNA-ekstraktion

 

DNA-ekstraktion: Protease K kan hydrolysere histoner, der binder til DNA, hvilket tillader DNA at dissociere i opløsning. Efterfølgende blev urenheder fjernet ved forskellige metoder såsom phenolchloroform-ekstraktion, ethanolpræcipitation osv., og oprenset DNA blev opsamlet.
RNA-ekstraktion: Under RNA-ekstraktionsprocessen er RNA-enzymer almindeligvis til stede i miljøet, og selve prøvesystemet kan også indeholde RNA-enzymer, hvilket gør RNA meget modtageligt for nedbrydning. Tilføjelse af en lille mængde

2. In situ hybridiseringsteknologi

 

I in situ hybridiseringsteknologi bruges proteinase K almindeligvis til præ-hybridiseringsbehandling for at fordøje proteiner, der omgiver mål-DNA'et, øge chancen for probebinding til målnukleinsyren og forbedre hybridiseringssignalet. Det skal dog bemærkes, at når koncentrationen af ​​proteinase K er for høj, fordøjelsestiden er for lang, eller inkubationstemperaturen er for høj, kan det forårsage beskadigelse af cellestrukturen, hvilket fører til udskillelse af vævssnit og forsvinden af ​​cellekerner, og derved påvirke hybridiseringsresultaterne. Derfor er det i praktiske anvendelser nødvendigt at nøje kontrollere koncentrationen og behandlingstiden for proteinase K.

3. Virusinaktivering og desinfektion

 

Protease K kan på grund af sin stærke proteolytiske aktivitet bruges til virusinaktivering og desinfektion. Forskning har vist, at behandling af rent vand og husspildevand med en vis koncentration af proteinase K effektivt kan inaktivere vira. Protease K, som et virusinaktiverende desinfektionsmiddel, kan reducere den potentielle skade forårsaget af konventionelle oxidative kemiske desinfektionsmidler på menneskekroppen, og dets produktion og transport er sikker uden irreversibel miljøforurening.

4. Western blotting og pulselektroforese

 

Protease K er også blevet brugt i vid udstrækning til fremstilling af kromosom-DNA til pulserende elektroforese, Western blotting og andre eksperimenter. I Western blot-eksperimenter kan proteinase K bruges til at fjerne ikke-specifikke proteiner fra prøven, hvilket forbedrer specificiteten og følsomheden af ​​blottet. I pulselektroforeseeksperimenter kan proteinase K nedbryde proteinurenheder i DNA-prøver og forbedre elektroforeseeffektiviteten.

5. Proteinpåvisning og identifikation

 

Proteinase k pulverkan også bruges til påvisning og identifikation af visse proteiner. For eksempel, i studiet af overførbar spongiform encephalopati (TSE), kan proteinase K bruges til at fordøje proteiner i hjernevævsprøver og til at identificere tilstedeværelsen af prionproteiner ved at detektere patogene prioners resistens over for proteinase K. Derudover kan proteinase K også bruges til eksperimenter såsom bestemmelse af lokaliseringen af enzymer og enzymer, der fjerner enzymer, der er bundet til cellens membraner. som lysozym og ribonuklease A).

1. Medicinsk område

 

Klinisk anvendelse: Protease K har en vis medicinsk værdi i medicin. For eksempel behandling af fordøjelsesbesvær med gastrisk protease, behandling af bronkitis med sur protease, behandling af vaskulitis med elastase osv. Derudover er trypsin, chymotrypsin osv. også almindeligt anvendt til oprensning af kirurgiske purulente sår og behandling af pleurale serosale adhæsioner.
Virusdetektion og -diagnose: Protease K har også potentielle anvendelser til virusdetektion og -diagnose. Ved at fordøje proteinerne i virusprøven og blotlægge virusnukleinsyren giver det bekvemmelighed for efterfølgende nukleinsyretestning.

2. Industrisektoren

 

Læderindustrien: Protease K bruges i læderindustrien til hårfjerning og blødgørende behandling, hvilket kan spare tid og forbedre arbejdshygiejniske forhold.
Tekstilindustri: Protease K kan bruges i tekstilindustrier som f.eks. silkedegumming.
Fødevareindustrien: Protease K kan bruges i fødevareindustrien til kødmørning, alkoholafklaring mv.
Vaskemiddel: Enzymtilsat vaskemiddel er et nyt produkt inden for vaskemidler. Vaskemiddel indeholdende alkalisk protease kan fjerne blodpletter og proteinsnavs fra tøj. Men når du bruger det, skal du passe på ikke at røre ved huden for at undgå at beskadige proteinet på overfladen af ​​huden og forårsage allergiske reaktioner som udslæt og eksem.

Strukturelle egenskaber

 

Molekylvægten af ​​proteinase K er ca. 28900 daltons (28,9 kDa), og der er også litteraturrapporter på 29,3 kDa. Dens aminosyresekvens og tredimensionelle rumlige struktur minder meget om subtilisin fra serinproteasefamilien, men der er også nogle unikke egenskaber.

Disulfidbindingsstruktur: Protease K-molekyler indeholder disulfidbindinger, som øger deres stabilitet og gør dem i stand til at opretholde aktivitet over et bredt pH-område og høje temperaturforhold.
Ca ² ⁺ bindingssteder:Proteinase k pulverindeholder to Ca ² ⁺ bindingssteder, som, selvom de er langt fra det aktive center, er afgørende for at opretholde enzymets katalytiske aktivitet. Fjernelse af Ca ² ⁺ vil få protease K til at miste omkring 80 % af sin aktivitet, og genindførelse af Ca ² ⁺ kan kun delvist genoprette dens aktivitet.
Katalytisk triade: Protease K har en katalytisk triade Asp-His69-Ser224, som er en nøglestruktur for dens hydrolytiske aktivitet.

Virkningsmekanisme

 

Protease K kan fortrinsvis hydrolysere ester- og peptidbindinger, der støder op til C-terminalen af ​​hydrofobe aminosyrer, svovl-holdige aminosyrer og aromatiske aminosyrer, ved at hydrolysere proteiner til korte peptider. Dens virkningsmekanisme omfatter hovedsageligt følgende trin:

Enzymsubstratbinding: Efter at protease K er blandet med substratet, binder substratet sig til enzymets aktive sted og danner et enzymsubstratkompleks.
Katalytisk reaktion: Under påvirkning af det aktive sted hydrolyseres peptidbindingen af ​​substratet til dannelse af et produkt, der er adskilt fra enzymet.
Den stærke nedbrydningseffekt af protease K gør det til et nøglereagens i forskellige biokemiske reaktioner, især i DNA- og RNA-ekstraktionsprocesser. Protease K kan effektivt nedbryde proteiner bundet til nukleinsyrer, frigive nukleinsyrer og hæmme aktiviteten af ​​nukleaser, hvilket reducerer nedbrydningen af ​​nukleinsyrer under ekstraktion.

Proteinase k pulver, som en meget aktiv og substratspecifik serinprotease, har en bred vifte af anvendelser inden for biokemi, molekylærbiologi, medicin og industri. Det kan nedbryde proteiner, der binder til nukleinsyrer og frigiver nukleinsyrer; Forøg muligheden for prober til at binde til målnukleinsyrer i in situ hybridiseringsteknologi; Anvendes til virusinaktivering og desinfektion; Fjern proteinurenheder i Western blot og pulselektroforese eksperimenter; Har medicinsk værdi inden for medicin; Anvendes i industrielle områder såsom læderforarbejdning, tekstilindustri, fødevareindustri og fremstilling af vaskemidler. Men ved brug af proteinase K skal man være opmærksom på dens opbevaringsmetode og brugsbetingelser for at sikre dens stabilitet og aktivitet.

Proteinase K er en bredspektret-serinprotease, der er meget udbredt inden for molekylærbiologi, biokemi og medicinske forskningsområder på grund af dens unikke enzymatiske egenskaber og stabilitet. Som en frysetørret-pulverform spiller Proteinase K Powder en afgørende rolle i eksperimenter såsom nukleinsyreekstraktion, proteinfordøjelse og vævshomogenisering. Brugen af ​​ethvert biologisk reagens er dog forbundet med potentielle risici, og dets uønskede reaktioner kan involvere operatørers sundhed og sikkerheden i det eksperimentelle miljø.

Populære tags: proteinase k pulver cas 39450-01-6, leverandører, producenter, fabrik, engros, køb, pris, bulk, til salg