Thiazolylblå CAS 298-93-1

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. er en af ​​de mest erfarne producenter og leverandører af thiazolyl blue cas 298-93-1 i Kina. Velkommen til engros bulk thiazolyl blå cas 298-93-1 af høj kvalitet til salg her fra vores fabrik. God service og rimelige priser er til rådighed.

Thiazolyl blå, bedre kendt som MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid), rummer en fascinerende dualitet - det er både et vigtigt værktøj inden for cellebiologi og en kamæleonisk kemisk særhed. Dette gule krystallinske pulver gennemgår en opsigtsvækkende metamorfose i levende celler: mitokondrielle reduktaser spalter dens tetrazoliumring og omdanner den til et uopløseligt lilla formazan-præcipitat - en reaktion så visuelt slående, at den er blevet guldstandarden for måling af cellernes levedygtighed. Men ud over laboratoriebænken afslører MTT mere esoterisk adfærd; dens krystallinske struktur danner ejendommelige "sildebens"-mønstre under mikroskopi, mens dens redoxegenskaber tillader den at deltage i eksotiske fotokemiske reaktioner, når den udsættes for specifikke bølgelængder af lys. Mærkeligt nok udviser forbindelsen et sjældent fænomen kaldet "metakromasi" - der forekommer forskellige farver afhængigt af koncentration og molekylært miljø - en egenskab, der engang blev udnyttet af tekstilkemikere til at skabe "smarte" farvestoffer. Nylige undersøgelser har afsløret dens uventede rolle som en svag inhibitor af visse respiratoriske kædeenzymer, hvilket antyder, at dette allestedsnærværende assay-reagens kan have subtilt indflydelse på selve de metaboliske processer, som videnskabsmænd bruger det til at studere. Når de er opløst i organiske opløsningsmidler, viser MTT-opløsninger en usædvanlig fluorescensdæmpende effekt, der har undret fysiske kemikere, hvilket tyder på komplekse intermolekylære interaktioner, der stadig afventer fuld forklaring.

Thiazolyl blå,Det kemiske navn er 3-(4,5-dimethyl-2-thiazol)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid, forkortet til MTT, som er en vigtig organisk forbindelse. Siden Mosman første gang rapporterede brugen af ​​MTT-farvning til at bestemme cellevækst og overlevelse i 1983, er MTT blevet anvendt bredt inden for områder som biovidenskab, medicinsk forskning og lægemiddeludvikling. Det følgende er en detaljeret forklaring af formålet:

Ansøgning i cellebiologisk forskning

 

MTT er en af ​​de klassiske metoder til bestemmelse af celleproliferation. Under cellekultur kan dehydrogenaser såsom succinatdehydrogenase i levende celle mitokondrier reducere eksogen MTT til uopløseligt blålilla krystallinsk formazan, som aflejres i cellen. Døde celler mangler denne reducerende evne og producerer derfor ikke formazan. Ved at opløse formazan i celler og måle dets lysabsorptionsværdi ved specifikke bølgelængder (såsom 490nm eller 562nm) ved hjælp af en enzym-linked immunosorbent assay (ELISA)-læser, kan antallet af levende celler reflekteres indirekte. Inden for et bestemt celletal er mængden af ​​dannede MTT-krystaller proportional med antallet af celler, så celleproliferation kan bestemmes baseret på den målte absorbansværdi (OD-værdi).

Ansøgning i cellebiologisk forskning

 

MTT kan også bruges til at bestemme toksiciteten af ​​lægemidler eller andre behandlingsmetoder (såsom strålebestråling) på dyrkede celler in vitro. Ved at sammenligne behandlingsgruppens og kontrolgruppens OD-værdier kan lægemidlers eller behandlingsmetoders effekt på celleaktivitet evalueres. Jo større OD-værdien er, jo stærkere er celleaktiviteten; Tværtimod indikerer det, at jo svagere celleaktivitet eller jo større celletoksicitet. Denne metode har brede anvendelser inden for lægemiddelscreening, toksikologisk forskning og andre områder. Selvom MTT hovedsageligt bruges til at måle celleproliferation og cytotoksicitet, kan det i nogle tilfælde også bruges til at hjælpe med studiet af celleapoptose. Under processen med celleapoptose ændres enzymaktiviteten inde i cellen, hvilket kan påvirke MTT's reducerende evne. Ved at sammenligne forskellen i OD-værdier mellem apoptotiske celler og normale celler kan forekomsten af ​​celleapoptose foreløbigt bestemmes. Det skal dog bemærkes, at MTT ikke er en specialiseret metode til påvisning af celleapoptose, og dens resultater skal analyseres grundigt i forbindelse med andre apoptosedetektionsmetoder.

Anvendelse i lægemiddeludvikling

 

I processen med lægemiddeludvikling er MTT-assay en almindeligt anvendt høj-lægemiddelscreeningsmetode. Ved at co-inkubere testlægemidlet med celler og bruge MTT-assay til at måle ændringer i celleaktivitet, kan potentielle aktive lægemiddelmolekyler hurtigt screenes. Denne metode har fordelene ved nem betjening, pålidelige resultater og høj gennemstrømning og har vigtig anvendelsesværdi i det tidlige stadie af lægemiddeludvikling. MTT-assayet kan også bruges til at studere lægemidlers virkningsmekanisme. Ved at sammenligne ændringerne i celleaktivitet under forskellige lægemiddelbehandlingsbetingelser kan lægemidlers indvirkning på processer som celleproliferation og apoptose foreløbigt bestemmes. Ved at kombinere andre molekylærbiologiske teknikker, såsom Western blot og flowcytometri, kan lægemidlers mål og signalveje afsløres yderligere. I lægemiddelsikkerhedsevaluering kan MTT-assay bruges til at vurdere lægemidlers toksiske virkninger på celler. Ved at måle OD-værdiændringer af celler efter lægemiddelbehandling er det muligt at bestemme, om lægemidlet har cytotoksicitet og styrken af ​​toksicitet. Dette er af stor betydning for at vejlede præklinisk forskning og klinisk anvendelse af lægemidler.

Anvendelsen af ​​MTT på andre områder

 

I immunologisk forskning kan MTT-assay bruges til at bestemme lymfocytters spredningsevne. Ved at co-inkubere lymfocytter med antigener eller immunstimulerende midler og måle ændringer i celleaktivitet ved hjælp af MTT-assay, kan lymfocytternes immunresponsevne evalueres. Denne metode har brede anvendelser inden for vaccineudvikling, immunterapi og andre områder. I onkologisk forskning kan MTT-assay bruges til at bestemme spredningsaktiviteten og lægemiddelfølsomheden af ​​tumorceller. Ved at sammenligne ændringerne i OD-værdier for tumorceller under forskellige lægemiddelbehandlingsbetingelser kan lægemiddelmolekyler med hæmmende virkninger på tumorceller screenes, og deres anti-tumoreffekter kan evalueres. Dette er af stor betydning for at vejlede den kliniske behandling af tumorer. I miljøtoksikologisk forskning kan MTT-assay bruges til at evaluere de toksiske virkninger af miljøforurenende stoffer på celler. Ved at co-inkubere celler med forskellige koncentrationer af forurenende stoffer og måle ændringer i celleaktivitet ved hjælp af MTT-assay, kan toksiciteten og virkningsmekanismen af ​​forurenende stoffer bestemmes. Dette er af stor betydning for vurderingen af ​​de økologiske risici ved miljøforurenende stoffer og udformningen af ​​miljøbeskyttelsespolitikker. 

Eksperimentelle trin afthiazolylblåtmetode:

1: Trypsin fordøjer celler i logaritmisk fase, centrifugerer og opsamler dem efter afslutning for at fremstille cellesuspension og justerer dens koncentration til 5-10 ved celletal × 104/ml. For begyndere er det nødvendigt at få cellerne til at nå 5-10 × 104/ml ved ofte ikke, hvor de skal starte. Jeg er her for at give dig en simpel metode til indledningsvis at bestemme antallet af celler.

Tag 25 cm2 almindeligvis brugt til cellekultur som et eksempel:

1) Celletætheden er omkring 80%~90% (figuren nedenfor viser den omtrentlige tilstand af celler ved 80%~90% tæthed). Efter fordøjelse og centrifugering fjernes supernatanten og tilsættes 3 ml medium for at blande det.

2) Tag et nyt 15 ml sterilt centrifugerør (til næste trin af podning af 96-brønds plade) og fyld det med ca. 9 ml medium

3) Tag 1 ml fra 3 ml cellesuspensionen fremstillet i det første trin, tilsæt det i det øvre rør, og tæl cellerne efter blanding. På dette tidspunkt er det generelt 5-10 eller mindre × 104/ml, hvilket svarer til 5-10 celler pr. celle i 4 celler på celletællepladen (se figuren nedenfor); Hvis koncentrationen ikke er tilstrækkelig, tilsættes cellesuspensionen i henhold til tælleresultatet, og hver dråbe beregnes som 50 ul.

4) Antallet af celler bør justeres i henhold til forsøgets forskellige formål. I et almindeligt celleproliferationsforsøg kan der f.eks. anvendes 2000 celler pr. brønd (svarende til cellesuspensionstæthed på 2 x 104/ml), 5000 til 10.000 celler pr. brønd (svarende til cellesuspensionstæthed på 5 x 104/ml). Derudover bør antallet af celler også bestemmes i henhold til deres egne karakteristika, såsom væksthastighed. For eksempel kan tætheden af ​​celler, der vokser hurtigere, være lidt mindre.

2. Efter klargøring af cellesuspensionen blandes den forsigtigt og tilsættes 100 ul i hvert hul, således at tætheden af ​​cellerne, der skal testes, er 5000-10000/hul (kanthullet er fyldt med sterilt PBS).

L Bemærk: Fordi cellerne vil fortsætte med at sætte sig efter blanding, er det nødvendigt at blande gentagne gange under podningsprocessen, såsom at blande en gang hver sjette huller, for at sikre, at celletætheden af ​​podningen er nøjagtig den samme mellem hullerne, hvilket er afgørende for resultaterne af MTT.

3. Sæt den inokulerede cellekulturplade i inkubatoren til dyrkning, indtil cellemonolaget er dækket med bunden af ​​hullet (96-hullers flad plade), og tilsæt lægemidlet med koncentrationsgradient. I princippet kan lægemidlet tilsættes efter at cellen er fastgjort til væggen, eller to timer eller en halv dag, men vi tilføjer ofte lægemidlet om eftermiddagen den foregående dag og næste morgen. Generelt indstilles 5-7 gradienter, 100 ul pr. hul og 3-5 multiple huller. Det anbefales at sætte 6, ellers er det svært at afspejle den virkelige situation. Følgende figur kan bruges som referencetrin for 96-hullers plade.

L Til dosering tilføjer nogle mennesker direkte lægemidler til 96-brønds plader i forskellige volumener for at danne en koncentrationsgradient. Men jeg synes, vi skal prøve at blande forskellige koncentrationer af lægemidler i EP-røret, og derefter fjerne kultursupernatanten fra 96-brøndspladen (som kan suges væk med en udledningspistol) og tilføje 100 ul dyrkningsmedium indeholdende forskellige koncentrationer af lægemidler, som kan sikre nøjagtigheden af ​​lægemiddelkoncentrationen. Derudover skal det bemærkes, at hvis denne metode anvendes, skal du ikke suge hele 96-brønds pladekulturopløsningen, før du tilføjer medicin. Du bør tilføje prøver umiddelbart efter at have suget en del af det for at undgå celledød på grund af udtørring af 96-brøndspladen.

Inkuber med 4,5% CO2 ved 37 grader i 16-48 timer, og observer virkningen af ​​lægemidlet under det omvendte mikroskop. Den følgende figur viser en typisk lægemiddelgradient af cytotoksicitet.

4. Tilsæt 10 ul MTT-opløsning (5mg/ml, dvs. . 0.5% MTT) til hver brønd, og fortsæt med at dyrke i 4 timer. Hvis stoffet kan reagere medthiazolylblåtkulturopløsningen kan kasseres efter centrifugering, og kulturopløsningen indeholdende MTT kan tilsættes efter vask med PBS i 2-3 gange.

5. Stop kulturen og forbered til opløsning og krystallisation.

Thiazolyl blå, hvis kinesiske navn er Methyl Blue, er en vigtig organisk forbindelse, der er meget udbredt inden for medicin, biologi og kemi. i medicin bruges det ofte til behandling af nitritforgiftning, cyanidforgiftning osv., og bruges også til diagnosticering og adjuverende behandling af nogle sygdomme; I biologisk forskning kan det bruges som et farvningsmiddel til mærkning af celler eller væv. Men ligesom mange lægemidler kan methylenblåt også have en række bivirkninger under brug:

Bivirkninger af fordøjelsessystemet

Kvalme og opkastning er en af ​​de almindelige bivirkninger ved fordøjelsessystemet af methylenblåt. Når methylenblåt kommer ind i kroppen, kan det stimulere mave-tarmslimhinden og forårsage kvalme og endda opkastning i alvorlige tilfælde. Dette symptom er mere udtalt, når den intravenøse injektionshastighed er for høj, eller dosis er for stor. For eksempel kan patienter i nogle kliniske tilfælde opleve betydelig kvalme og opkastning kort efter hurtig intravenøs injektion af methylenblåt, hvilket påvirker deres komfort og behandlingsoplevelse. Nogle patienter kan opleve mavesmerter efter brug af methylenblåt, og graden af ​​smerte kan variere afhængigt af individuelle forskelle, lige fra mildt ubehag til mere alvorlig smerte.

Samtidig kan det også være ledsaget af diarré, som kan skyldes interferens af methylenblåt på tarmens peristaltik og fordøjelsesfunktion, hvilket fører til abnorm tarmbevægelse og ændringer i fordøjelsesvæskesekretionen.Langsigtet eller hyppig forekomst af mavesmerter og diarré påvirker ikke kun patientens fysiske helbred, men kan også føre til optagelse af næringsstoffer, men kan også føre til andres fysiske helbred.

Bivirkninger af urinvejene

Efter brug af methylenblåt vil urinfarven blive blå, hvilket skyldes udskillelse af methylenblåt og dets metabolitter i urinen gennem nyrerne. Generelt er denne ændring i urinfarve midlertidig og vil ikke have en alvorlig indvirkning på det fysiske helbred. Men i nogle særlige tilfælde, såsom patienter med urinvejssygdomme, kan ændringer i urinfarve forstyrre diagnosticeringen af ​​sygdommen, og læger skal udføre en omfattende analyse baseret på andre undersøgelsesindikatorer. Under vandladning kan nogle patienter føle en stikkende fornemmelse ved urinrørsåbningen.

 

Dette kan skyldes den stimulerende effekt af methylenblåt på urinrørets slimhinde, især når urinkoncentrationen er høj eller urinrørets slimhinde gnides under vandladning, vil den stikkende fornemmelse være mere udtalt. Dette symptom kan forårsage visse ubehag for patienter og påvirke deres daglige liv.

Neurologiske bivirkninger

Svimmelhed og hovedpine er almindelige neurologiske bivirkninger af methylenblåt. Efter brug af methylenblåt kan patienter føle sig svimmel og desorienteret i hovedet eller opleve ubehag såsom hævelse og smerter i hovedet. Dette symptom kan påvirke patientens opmærksomhed og tænkeevne og reducere arbejds- og livseffektiviteten. Forekomsten af ​​svimmelhed og hovedpine kan være relateret til virkningerne af methylenblåt på hjernens blodkar og nerver, og den specifikke mekanisme kræver stadig yderligere forskning. I sjældne tilfælde kan methylenblåt forårsage bevidsthedsforstyrrelser såsom døsighed, koma osv.

Dette skyldes normalt overdreven brug af methylenblåt eller patienter, der er overfølsomme over for lægemidlet, hvilket forårsager alvorlig hæmning af centralnervesystemet. Bevidsthedsforstyrrelser er en alvorlig bivirkning, der kan bringe patientens livssikkerhed i fare og kræver øjeblikkelig redningsbehandling.

1.Hvad er brugen af ​​thiazolylblåt tetrazoliumbromid?

Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue (MTT) kan anvendes til måling af celleproliferation. MTT producerer en gullig opløsning, der omdannes til mørkeblå, -vanduopløselig MTT-formazan af mitokondrielle dehydrogenaser fra levende celler.

2. Er Thiazolyl Blue sikkert at opbevare?

Temperaturforhold: Forsegl pulveret og opbevar det i køleskab ved -20 grader for frysekonservering, hvilket effektivt kan forlænge holdbarheden (normalt 1-2 år); til korttidsopbevaring (inden for 1 måned), kan den midlertidigt opbevares under 4 graders køleforhold.

Lys-tæt og fugtigheds-krav: MTT-pulver er lys-følsomt og skal opbevares i brune reagensflasker eller gennemsigtige flasker indpakket med stanniol. I mellemtiden bør tørremidler (f.eks. silicagel) tilsættes for at forhindre, at pulveret absorberer fugt og kager.

3. Vil Thiazolyl Blue farve ændre sig?

Når opløsningen viser et blålilla bundfald eller bliver mørkere i farven, indikerer det, at det er blevet oxideret og ikke kan fortsætte med at blive brugt.
Undgå at placere opløsningen ved stuetemperatur eller i et let miljø, da det hurtigt kan svigte.

Populære tags: thiazolyl blue cas 298-93-1, leverandører, producenter, fabrik, engros, køb, pris, bulk, til salg