Thiazolylblå cas 298-93-1

Thiazolylblåer en organisk forbindelse med molekylær formel C18H16BRN5S . gult eller orange pulver, smeltepunkt: 195 grad (nedbrydning) . lidt opløseligt i methanol, men næppe opløselig i vand eller ethanol . Det kan ikke helt opløses med ether, acetone eller ethyl acetate {{{} Opløst i DMSO . Det fremstilles ofte til 5 mg/ml stamopløsning . Det bruges mest som laboratorieanalytisk reagens .

Thiazolylblå,The chemical name is 3- (4,5-dimethyl-2-thiazole) -2,5-diphenyltetrazolium bromide, abbreviated as MTT, which is an important organic compound. Since Mosman first reported the use of MTT staining to determine cell Vækst og overlevelse I 1983 er MTT blevet bredt anvendt inden for områder som livsvidenskab, medicinsk forskning og lægemiddeludvikling . Følgende er en detaljeret forklaring af dens formål:

Anvendelse i cellebiologisk forskning

 

MTT is one of the classic methods for determining cell proliferation. During cell culture, dehydrogenases such as succinate dehydrogenase in live cell mitochondria can reduce exogenous MTT to insoluble blue purple crystalline formazan, which deposits in the cell. Dead cells lack this reducing ability and therefore do not produce Formazan . ved at opløse Formazan i celler og måle dens lysabsorptionsværdi ved specifikke bølgelængder (såsom 490Nm eller 562Nm) ved hjælp af en enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) læser, antallet af levende celler kan indirekte reflekteres . inden for et vist område af celletal, beløbet af mt mtt-kræden kan indirekte reflekteret. til antallet af celler, så celleproliferation kan bestemmes baseret på den målte absorbansværdi (OD -værdi) .

Anvendelse i cellebiologisk forskning

 

MTT kan også bruges til at bestemme toksiciteten af ​​medikamenter eller andre behandlingsmetoder (såsom strålingsbestråling) på dyrkede celler in vitro . ved at sammenligne OD -værdierne for behandlingsgruppen og kontrolgruppen, effekten af ​​medikamenter eller behandlingsmetoder på celleaktivitet kan evalueres . den store værdi, jo større er celleaktiviteten; On the contrary, it indicates that the weaker the cell activity or the greater the cell toxicity. This method has wide applications in drug screening, toxicology research, and other fields. Although MTT is mainly used to measure cell proliferation and cytotoxicity, in some cases, it can also be used to assist in the study of cell apoptosis. During the process of cell apoptosis, the enzyme activity inside the cell changes, which may affect the reducing ability of MTT. By comparing the difference in OD values ​​between apoptotic cells and normal cells, the occurrence of cell apoptosis can be preliminarily determined. However, it should be noted that MTT is not a specialized method for detecting cell apoptosis, and its results need to be omfattende analyseret i forbindelse med andre metoder til detektion af apoptosis .

Anvendelse i lægemiddeludvikling

 

I processen med lægemiddeludvikling er MTT-assay en almindeligt anvendt medikamentscreeningsmetode med høj kapacitet . ved at inkubering af testmedicinen med celler og ved hjælp af MTT-assay til måling development. The MTT assay can also be used to study the mechanism of action of drugs. By comparing the changes in cell activity under different drug treatment conditions, the impact of drugs on processes such as cell proliferation and apoptosis can be preliminarily determined. By combining other molecular biology techniques such as Western blot and flow cytometry, Målene og signalveje for medikamenter kan yderligere afsløres . i evaluering af lægemiddelsikkerhed, MTT -assay kan bruges til at vurdere de giftige virkninger af medikamenter på celler . ved at måle od -værdier af celler efter lægemiddelbehandling, det er muligt at bestemme, om lægemidlet har cytotoksicitet og styrken af ​​toksik. dette er stort set betydnings og klinisk anvendelse af lægemidler .

Anvendelsen af ​​MTT på andre felter

 

I immunologisk forskning kan MTT -assay anvendes til at bestemme proliferationsevnen for lymfocytter . ved CO -inkubering af lymfocytter med antigener eller immunostimulanter og måle ændringer i celleaktivitet ved anvendelse af MTT -assay, immunresponsevnen af ​​lymfocytter kan evalueres . denne metode har bred anvendelser i vaccine -vaccine -evner, lymfocytter kan evalueres .} denne metode har bred anvendelse i vaccine i vaccine -vaccine -udvikling, lymfocytter. Immunoterapi og andre felter . I onkologisk forskning kan MTT-assay anvendes til at bestemme proliferationsaktiviteten og lægemiddelfølsomheden af ​​tumorceller . ved at sammenligne ændringerne i OD-værdier af tumorceller under forskellige lægemiddelbehandlingsbetingelser, lægemiddelmolekyler med inhibitive virkninger på tumorceller kan screenes, og deres anti-tumor-effekter kan være at være være at være være at være være at være være at være være at være at være at være, og deres anti-tumor-effekter kan være være at være være at være være at være være at være at være være at være være at være være at være være at være være at være at være anti-tumor-effekter. Evalueret . Dette er af stor betydning for vejledning af den kliniske behandling af tumorer . I miljømæssig toksikologi -forskning kan MTT -assay anvendes til at evaluere de toksiske virkninger af miljømæssige forurenende stoffer på celler . ved CO, der inkuberer celler med forskellige koncentrationer af forurenende stoffer og måling af ændringer i cellerne ved hjælp af MTTTT, den giftighed, toksikitet Forurenende stoffer kan bestemmes . Dette er af stor betydning for vurdering af de økologiske risici for miljøforurenende stoffer og formulering af miljøbeskyttelsespolitikker . 

Eksperimentelle trin påThiazolylblåmetode:

1: Trypsin digests logarithmic phase cells, centrifuges and collects them after termination to make cell suspension, and adjusts its concentration to 5-10 by cell count × 104/ml. For beginners, it is necessary to make cells reach 5-10 × 104/ml often doesn't know where to start. I'm here to provide you with a simple metode til oprindeligt at bestemme antallet af celler .

Tag 25 cm2, der ofte bruges til cellekultur som et eksempel:

1) Celletætheden er ca. 80% ~ 90% (nedenstående tallet viser den omtrentlige tilstand af celler ved 80% ~ 90% densitet) . efter fordøjelse og centrifugering, fjern supernatanten og tilføj 3 ml medium for at blande det .}

2) Tag en ny 15 ml steril centrifuge -rør (til det næste trin i inokulation af 96- godt plade) og fyld det med ca. 9 ml medium

3) Tag 1 ml fra 3 ml cellesuspension, der er fremstillet i det første trin, tilsættes det i det øverste rør og tæl cellerne efter blanding . på dette tidspunkt er det generelt 5-10 eller mindre × 104/ml, hvilket svarer til 5-10 celler pr. Celle i 4 celler i celletællingen (se figuren nedenfor); Hvis koncentrationen ikke er nok, tilsættes cellesuspensionen i henhold til tællingsresultatet, og hver dråbe beregnes som 50ul .

4) The number of cells should be adjusted according to the different purposes of the experiment. For example, in general cell proliferation experiment, 2000 cells per well can be used (equivalent to cell suspension density of 2 × 104/ml), 5000 to 10000 cells per well (equivalent to cell suspension density of 5 × 104/ml). In addition, the number of cells should also be determined I henhold til deres egne egenskaber, såsom væksthastighed . for eksempel, kan tætheden af ​​celler, der vokser hurtigere, være lidt mindre .

{{0} yld

L Bemærk: Fordi cellerne fortsat vil slå sig ned efter blanding, er det nødvendigt at blande gentagne gange under inokulationsprocessen, såsom blanding en gang hver seks huller, for at sikre, at celletætheden af ​​inokulation

3. Læg den inokulerede cellekulturplade i inkubatoren til dyrkning, indtil cellenmonolaget er dækket med bunden af ​​hullet (96- hul med flad plade), og tilsæt lægemidlet med koncentrationsgradient {{2} tilsættes i princippet ofte, at lægemidlet er tilsat efter, at cellen er fastgjort til væggen, eller to timer eller halvdelen af ​​en halv dag, men vi i princippet i princippet i eftermiddagen på efterspørgslen på efterspørgslen på efterfølgende af tidligere er vi påført på væggen, eller to timer eller halvdelen en halv dag, men vi er ofte den efterfølgende, efter efterspørgslen efter efterfølgende af efterfølgende af efterfølgende af efterfølgende af efterfølgende af efterfølgende af efterfølgende af efterfølgende af tidligere, at vi tidligere er den tidligere på den tidligere, eller der er påbud day, and the next morning. Generally, 5-7 gradients, 100ul per hole, and 3-5 multiple holes are set. It is recommended to set 6, otherwise it is difficult to reflect the real situation. The following figure can be used as a reference step for 96-hole plate.

L Til dosering tilføjer nogle mennesker direkte lægemidler direkte til 96- godt plader med forskellige volumener til dannelse hvilket kan sikre nøjagtigheden af ​​lægemiddelkoncentration . Derudover skal det bemærkes, at hvis denne metode bruges, skal du ikke suge alle 96- godt pladekulturopløsning, før du tilføjer medicin .} godt prøver umiddelbart efter at have suget en del af den for at undgå celledød på grund af tørring af 96- {{{.}}}}}}}}}}}}}}}}

Inkuber med 4 . 5% CO2 ved 37 grader for 16-48 timer, og observer virkningen af ​​lægemidlet under det inverterede mikroskop . Følgende figur viser en typisk lægemiddelgradient af cytotoksicitet.

{{0 ederThiazolylblåKulturløsningen kan kasseres efter centrifugering, og kulturopløsningen, der indeholder MTT, kan tilføjes efter at være vasket med PBS til 2-3 gange .

5. Stop kulturen og forbered dig på opløsning og krystallisation .

Thiazolylblå, hvis kinesiske navn er methylblåt, er en vigtig organisk forbindelse, der er vidt brugt i medicin, biologi og kemi . i medicin, bruges det ofte til behandling af nitritforgiftning, cyanidforgiftning osv. Væv . Imidlertid kan methylenblå som mange lægemidler også have en række bivirkninger under brug:

Populære tags: thiazolylblå cas 298-93-1, leverandører, producenter, fabrik, engros, køb, pris, bulk, til salg